本文標題："免疫細胞染色法之雙重染色法介紹"
發布者：yiyi ------ 分類: 站內動態 ------ 人瀏覽過 -----時間：2012-11-16 14:49:0
免疫細胞染色法之雙重染色法介紹
雙重染色法（Double stain）
利用雙重染色法可評估所培養之細胞比例。方法同單一染色，但在給予一
級抗體時，可加入兩種抗體同時處理，例如同時加入 mouse anti-ED1 及 rabbit
anti-GFAP 置于 4℃，隔夜（overnight），經 TBS 清洗三次（10 分鐘/次）后，先給
予一種二級抗體辨別一種細胞，處理一小時后再以 TBS 清洗三次（10 分鐘/次）
后，加入加入 peroxidase-conjugated streptavidin 于室溫下反應三十分鐘后，再以 TBS
清洗三次（10 分鐘/次）后，以 DAB 進行呈色反應；觀察后，加入另一二級抗體
以辨識另一種細胞，后續操作方式同上述。顯微鏡下，觀察到不同一級抗標示不
同種類細胞，可鑑定二種細胞所佔之比例
不同細胞型態比率的估算方式，是采用免疫細胞化學染色法在同一盤的不同
孔分別以 anti-GFAP（代表星狀膠質細胞）或 anti-ED1（代表微小膠質細胞）進行
染色。在光學顯微鏡下，每孔以隨機選定四處進行照像；然后在照片上觀察并計
算有被染色的細胞數佔有被染上的細胞數加上未染上的細胞數（總細胞數）之百
分比。每一孔的四個數值，平均后與其他孔的平均值相比較，可估算出不同型態
之細胞所佔的比率，即：
細胞數百分比 = 被染色的細胞 ÷（被染上的細胞＋未被染上的細胞）
2.免疫螢光染色法（immunofluorescence staining）
方法同單一染色，加入一級抗體置于 4℃，隔夜（overnight）；經 TBS 清洗后，
加入含有螢光物質的二級抗體（如：fluorescein isothiocyanate〔FITC〕-conjugated anti
mouse IgG 或 Rodamin -conjugated anti-mouse IgG）避光，處理一小時后以 PBS 清
洗三次（10 分鐘/次）后即可以螢光顯微鏡觀察結果及照像。
抗體使用濃度
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